產(chǎn)品概述
細(xì)胞中的線粒體作為有氧呼吸產(chǎn)生ATP的主要場所，是體內(nèi)重要的細(xì)胞器之一，常被用于早期細(xì)胞毒性、氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡等研究中1)。線粒體活性的降低與機(jī)能失調(diào)，已被證實與癌癥、衰老、神經(jīng)退行性疾病 (如阿爾茲海默癥、帕金森病等) 等密切相關(guān)2)3)。
JC-1是一種被廣泛使用的小分子線粒體膜電位探針，依賴于線粒體膜電位在線粒體中聚集，染料伴隨聚集過程，熒光從綠色 (530 nm) 變?yōu)榧t色 (590 nm)。當(dāng)線粒體發(fā)生去極化，紅/綠熒光強(qiáng)度比值降低。以往的研究者反映，JC-1不易溶于水并有大量沉淀產(chǎn)生。但與其他公司的產(chǎn)品不同，同仁化學(xué)研究所研制的JC-1試劑解決了這一問題，避免了沉淀的產(chǎn)生。同時使用試劑盒中配制的成像緩沖液 (Imaging Buffer)，可大幅降低熒光背景并在檢測過程中保護(hù)細(xì)胞不受損傷。
當(dāng)JC-1工作液的濃度為2 μmol/l, 每次用量為100 μl時，可以檢測500次。
產(chǎn)品特點
1.為什么要檢測線粒體膜電位
線粒體不僅是細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生能量的場所，它還與癌癥、衰老、阿爾茲海默癥、帕金森等神經(jīng)變異性疾病密切相關(guān)。因此，針對線粒體狀態(tài)的研究非常重要，其中線粒體膜電位的變化經(jīng)常被作為重要的指標(biāo)之一檢測。
當(dāng)線粒體正常、膜電位差保持不變時，JC-1會聚集并發(fā)出紅色熒光，而當(dāng)膜電位降低時，JC-1會作為單體存在并發(fā)出綠色熒光。紅色和綠色熒光強(qiáng)度的變化可以作為檢測線粒體狀態(tài)的指標(biāo)。
2.初次使用也很容易上手
3.去極化的檢測實例
使用去極化劑carbonylcyanide-p-trifluoromethoxyphenylhydrazone（FCCP）對HeLa細(xì)胞進(jìn)行處理，用本試
劑盒進(jìn)行檢測?？梢园l(fā)現(xiàn)與未加藥物的細(xì)胞相比，加藥組細(xì)胞的紅色熒光明顯減少。
實驗條件
JC-1濃度： 2 μmol/l in MEM, 染色時間30 min
FCCP濃度：100 μmol/l， FCCP處理時間1 h
檢測條件
Green : Ex 488 nm/ Em 500-550 nm;
Red : Ex 561 nm/ Em 560-610 nm;
標(biāo)尺: 20 μm
操作步驟
實驗例
1.誘導(dǎo)凋亡的實驗例
1.1 熒光顯微鏡
通過熒光顏色的改變判斷由凋亡導(dǎo)致的線粒體膜電位的變化。
檢測條件
Green: Ex 488 nm / Em 500-550 nm
Red : Ex 561 nm / Em 560-610 nm
標(biāo)尺: 80 μm
1.2 流式細(xì)胞儀
定量分析單個細(xì)胞的膜電位變化
檢測條件
Green: Ex 488 nm / Em 515-545 nm
Red : Ex 488 nm / Em 564-604 nm
1.3 酶標(biāo)儀
確認(rèn)孔板中吸光度來判斷線粒體膜電位的變化
檢測條件
Green: Ex 485 nm / Em 525-545 nm
Red : Ex 535 nm / Em 585-605 nm
2.誘導(dǎo)自噬的實驗例
使用表達(dá)Parkin的HeLa細(xì)胞，分別使用線粒體自噬試劑盒（Mitophagy Detection Kit：MD01）和線粒體膜電位檢測試劑盒（JC-1 MitoMP Detection Kit： MT09）來觀察添加和不添加CCCP（羰基氰化物間氯苯）的線粒體狀態(tài)的變化。
結(jié)果證明在未經(jīng)CCCP處理的細(xì)胞中幾乎未檢測到線粒體自噬的發(fā)生，并且線粒體膜電位正常維持。 而在添加了CCCP的細(xì)胞中，證實了線粒體膜電位的降低（JC-1的紅色熒光的降低）和線粒體的自噬（Mtphagy染料的熒光的增強(qiáng)）。
<檢測條件>
線粒體自噬檢測
Ex：561 nm，Em：570-700 nm
線粒體膜電位檢測
綠色Ex：488 nm，Em：500-550 nm
紅色Ex：561 nm，Em：560-610 nm
實驗條件
1.將Parkin質(zhì)粒導(dǎo)入HeLa細(xì)胞
使用HilyMax（貨號：H357）將Parkin質(zhì)粒引入HeLa細(xì)胞中（Parkin質(zhì)粒/HilyMax試劑：0.1 μg/0.2 μl）
然后過夜培養(yǎng)，收集細(xì)胞進(jìn)行以下檢測。
2.自噬檢測
向表達(dá)Parkin的HeLa細(xì)胞中添加0.1 μmol/l Mtphagy工作溶液，并在37°C下孵育30分鐘。然后將細(xì)胞用HBSS洗滌，加入10 μg/ml CCCP/MEM溶液，并在37℃下孵育2小時。熒光顯微鏡下觀察處理后的細(xì)胞。
3.線粒體膜電位檢測
將10 μg/ml的CCCP/MEM溶液添加至表達(dá)Parkin的HeLa細(xì)胞中，并在37℃下孵育1.5小時。加入4 μmol/l的JC-1工作溶液使終濃度至2 μmol/l，并將細(xì)胞溶液在37℃下孵育30分鐘。孵育后將細(xì)胞用HBSS洗滌，加入成像緩沖液，在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞。
3.線粒體膜電位與細(xì)胞周期關(guān)聯(lián)性
將已知能在細(xì)胞周期的G2/M期起作用以終止細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞衰老的阿霉素（DOX）加入A549細(xì)胞后，
使用細(xì)胞周期檢測試劑盒藍(lán)色（產(chǎn)品代碼：C549）/深紅色（產(chǎn)品代碼：C548）后檢測。
結(jié)果證實了A549細(xì)胞的細(xì)胞周期確實發(fā)生了變化，同時用細(xì)胞衰老檢測試劑盒--SPiDER-βGal（產(chǎn)品代碼：SG03）證實了細(xì)胞產(chǎn)生衰老，實驗證實了線粒體膜電位會發(fā)生變化。
參考文獻(xiàn)
